如何看待西班牙研究人员称在去年3月废水样本中检出新冠病毒？
西班牙研究人员在去年3月的废水样本中检出新冠病毒的发现，是一项具有里程碑意义的科研成果，它为我们理解新冠病毒的传播、演变以及公共卫生监测提供了宝贵的信息。要全面理解这项发现的意义，我们需要从多个角度进行深入分析：
1. 时间节点的重要性：早期传播的证据
提前了官方发现的时间： 该研究的主要亮点在于，废水样本中的病毒检出时间（去年3月）早于西班牙官方报告首例确诊病例的时间（去年1月底至2月初）。这意味着新冠病毒可能在官方记录之前就已经在西班牙境内传播。
印证了早期无症状传播的可能性： 如果病毒在3月就已经存在于废水样本中，那么当时很可能已经存在一定数量的感染者，其中许多可能没有表现出症状，或者症状轻微而被忽略。这有力地支持了新冠病毒早期存在大量无症状传播者的论点，也解释了为什么病毒能够悄无声息地传播开来。
对疫情溯源的启示： 这项发现为更深入地追溯病毒的源头和早期传播路径提供了新的线索。虽然不能直接证明病毒的起源地，但它提示我们，在早期阶段，病毒的传播可能比我们当时掌握的信息更为广泛。
2. 废水监测的价值：一种创新的公共卫生工具
非侵入性、大规模的监测： 与传统的个体检测（如鼻拭子）不同，废水监测是一种非侵入性、低成本、大规模的监测方法。它能够收集整个社区或区域的样本，反映该区域内人群的整体感染情况。
早期预警系统： 病毒在感染者排出体外并通过粪便排出后，会进入污水系统。因此，废水监测可以比临床病例报告更早地检测到病毒的出现和扩散趋势。当废水样本中检测到病毒时，就意味着社区可能已经存在感染，可以为公共卫生部门及时采取干预措施提供预警。
监测病毒变异： 通过对废水样本进行基因测序，研究人员可以追踪病毒的变异情况。这对于了解病毒的进化、预测其传播能力和致病性变化至关重要。
评估控制措施的效果： 随着疫苗接种和公共卫生措施的实施，废水监测可以用来评估这些措施对病毒传播的实际效果，例如病毒载量的下降。
3. 西班牙研究的意义和局限性
意义：
为新冠疫情早期传播提供了强有力证据： 西班牙这项研究是对之前一些研究（例如意大利、法国等国家在早期废水样本中发现病毒的报道）的有力补充和印证，进一步巩固了新冠病毒早期传播的证据链。
推动了废水监测技术的应用： 这项研究的成功应用，极大地提升了全球对废水监测在传染病监测和防控中作用的认识，促使更多国家和地区开始建立和完善废水监测体系。
提供了宝贵的公共卫生数据： 研究结果为流行病学模型和疫情预测提供了更准确的输入数据，帮助政府更有效地规划医疗资源和制定公共卫生政策。
促进了国际科学合作： 这项研究是全球科学家共同努力的一部分，促进了不同国家和研究机构之间的知识共享和技术交流。
局限性：
无法确定具体感染者： 废水监测只能显示病毒在人群中的存在，但无法确定是哪个个体感染了病毒，也无法区分是活病毒还是失活病毒的片段。
病毒浓度与感染人数的关系复杂： 废水中病毒的浓度受到多种因素影响，例如粪便排泄量、病毒载量、病毒在下水道系统中的降解情况、稀释程度等，因此将废水中的病毒浓度直接换算成确切的感染人数存在一定的挑战。
样本采集和处理的标准化问题： 确保样本采集、运输和处理过程的标准化对于获得可靠的结果至关重要，这需要持续的投入和改进。
可能存在假阳性或假阴性： 尽管技术在不断进步，但仍然可能存在假阳性（将其他病毒误判为新冠病毒）或假阴性（未检测到实际存在的病毒）的情况。
4. 对未来公共卫生监测的启示
建立常态化废水监测网络： 西班牙的研究以及其他国家的类似发现，应该促使各国建立起常态化、系统化的废水监测网络，将其作为公共卫生监测体系的重要组成部分。
加强跨部门合作： 废水监测需要卫生部门、环保部门、水务部门等多个部门的紧密合作，才能实现信息的有效共享和整合。
利用大数据和人工智能： 将废水监测数据与临床病例数据、基因测序数据等相结合，利用大数据和人工智能技术进行分析，可以更全面地洞察疫情动态，预测传播趋势。
关注新兴传染病： 废水监测不仅适用于新冠病毒，也可以监测其他通过粪口传播的传染病，为应对未来的新发传染病爆发提供重要的预警和监测手段。
总结来说，西班牙研究人员在去年3月废水样本中检出新冠病毒的发现，是一项非常重要的科学成果。它不仅为新冠疫情的早期传播提供了更早的证据，也极大地凸显了废水监测作为一种创新、高效的公共卫生监测工具的巨大潜力。这项研究的意义在于其预警能力、非侵入性以及在监测病毒变异方面的作用，对未来公共卫生体系的建设和传染病防控具有深远的指导意义。但同时，我们也需要认识到其局限性，并持续改进技术和方法，以充分发挥废水监测的优势。
网友意见
这个事情，被媒体炒作的热火朝天，不管是西班牙还是国内媒体，我看了下央视还有人民都转发了这条新闻，但是大家忽略了一个客观问题，预印本的论文研究不建议作为媒体报道的事实依据。
关于预印本网站的阅读须知，我建议大家看看这篇文章。
我们在来看下这篇论文
作者不算陌生，前段时间宣布在1月份的西班牙污水处理厂废水样本里检测到病毒的就是他们团队。
研究团队用的检测方式与以前他们用的方式类似，主要检测了聚合酶（RdRp）基因，IP2和IP4片段，E蛋白的E片段以及N蛋白的N1和N2片段。
作者在分析污水处理厂的历史样本的时候，有一个“惊人的”发现。样本时间范围包含从2018年（1月至3月），2019年（1月，3月，9月至12月）和2020年（1月至3月）。
看图：
作者在2019年3月12日的样本中测出了IP2和IP4含量。于是作者就凭此内容推断去年3月西班牙就有新冠病毒流传。
这就是论文得出的结论。
那这个可信度有多少？
如果连续在19年1-3月或者后续的时间里检测到病毒片段，那肯定可以说明病毒存在情况，但是在众多的样本中只有这1天的样本中检测出，那是不是要考虑样本在操作中被污染？在排除污染以后需要确定IP2和IP4阳性扩增的结果情况，能否在复现？也就是说在这个样本中能否在重复这个检测结果？为什么只有IP2和IP4检测到了阳性，其他都是No呢?是否检测出来的是其他的类SARS病毒基因片段？
论文研究者有没有对阳性样本做过宏基因组测序？如果有的话相信能得到更多的答案，但是不确定他的样品里能否找到足够的序列片段测序。
如果这些问题能够在正式发表论文中得到一个解答，那么我们整个对病毒的认知都需要做出一个调整。如果不能，那么这个事情就没法说了，从科学角度来说没有意义。从其他角度到是给很多人提供了一个打嘴炮的材料。
这条新闻于6月26日在西班牙各媒体曝出，主要内容基本都是说在去年3月的巴塞罗那污水厂的样本中检出了新冠病毒的基因序列。
然而正如新冠病毒期间满天飞的各类学术纷争，这篇文章基于的文献也是个预印本，也就是没有经过同行评议的文章，理论上是需要谨慎对待的。无奈媒体们都想搞个大新闻，于是6.13就发在medrxiv上的预印本就被西语媒体们发出来，并互相疯狂转载了。
于是我去看了一眼这篇预印本。第一印象是真短，而且标题也没提到发现2019年3月病毒的事情，我以为是又乌龙了...
接着往下看，文章大概讲解了他们通过研究巴塞罗那两个污水处理厂的污水样本想要探寻新冠病毒在当地的具体发展情况。似乎听起来还挺可行，作者们也就是想鼓励把这个当成一个监测区域疫情发展的工具。作者也提到这两个污水处理厂的样本并不能完全相符合，因为WWTP2这个污水处理厂它会混雨水进管道之类的，导致生活污水被稀释。
不过当然这不是大家想要关注的重点，作者还提到，他们在污水样本中发现，从今年（2020）1.15开始，污水样本的新冠基因检测到的量就开始上升，作者认为这证明在西班牙第一例报告病例发生前，病毒已经开始传播了（这咱早就料到了）。
于是这作者就想啊，那是不是我们再往前做做看看呢？你看这新冠病毒它多像流感啊，说不定就有人得了但是自己不知道呢？这不测没关系，一测吓到了，作者从2018年一月的样本测到2019年12月的样本，除了2019年3月12日的一个样本以外，全部报告了阴性，作者也说这个发现很striking。不过，最后作者没有偏离主题，而是规规矩矩地表示这个工具可以在以后的病毒疫情情况监控中起到作用。
想必大家肯定想知道，这说法可靠吗？巴塞罗那去年3月真有病毒吗？看文献的话有一个问题就是他们只测了IP2和IP4的测试，而剩下的三个测试好像也没说有没有测，然而前面的研究都使用了五个测试，作者也没有讲为啥没测剩下的三个测试，（有人说是样本一次都用完了，我寻思这污水厂留的样本也不至于这么少吧）这一点上稍稍降低了这件事的置信度。
总的来讲，这篇文章还在预印本阶段，不能作为病毒追溯的实质性证据，只有在其他实验室做了类似的实验得出相似的结论后（不过确实很难复现，没有广泛传播的病毒在污水里的浓度堪忧），才能验证这个研究是否是solid。
不过如果这个是真的，那就又要扯出很多病毒传播的问题了。毕竟病毒爆发在武汉但是却在欧洲1月份就有检出，这就已经很奇怪了。
让子弹飞一会。
就那一个月样本有检出，此前没有不稀奇，此后也没有了，那就不是古老病毒的长期存在，这什么情况？
游客？
投毒？
我看完了这篇论文。只说重点。
-为什么要检测污水？
虽然新冠肺炎（COVID-19）主要是一种呼吸系统疾病，但大量的病毒（SARS-CoV-2）或病毒核酸片段在粪便中脱落，最终进入下水道。因此污水中的病毒检测有助于检测病毒是如何在人群之中传播的。
另外，目前尚且没有证据证实污水是新冠肺炎的传播渠道，因此有必要对其进行更多研究，这是这项研究的出发点之一。
检测了哪些污水？
研究人员对于巴塞罗那两个大型污水处理厂来自2018年（1-3月）、2019年（1-3月、9-12月）和2020年（1-3月）的污水冰冻样本进行分析。
处理方法大致如下，先将800毫升污水样本用20%的聚乙二醇浓缩，然后用3毫升的PBS缓冲液（看到这个词就回想起了我当年苦逼的实验经历）再悬浮，最后取1毫升浓缩液提取核酸，用 NucliSENS®萃取系统进行洗脱，
病毒检测怎么做？
病毒检测和核酸检测其实是两码事，病毒是由里面的核酸和外面的蛋白质外壳两部分组成。病毒个头很小，新冠病毒只有100纳米左右，大概是头发丝直径的六百分之一，所以我们很难直接检测活病毒，这个过程需要用到电子显微镜，还有他复杂的处理方式。
因此更多的是使用核酸检测，现在已经有了很成熟的核酸检测方法，比如RT-PCR技术。样本中的病毒核酸其实是很少的，RT-PCR的目的是将微量的特定核酸片段进行大幅扩增。PCR实际上就是不断循环扩增核酸片段的过程，达到阈值所需要的循环（cycle）越少，说明样本中特定核酸的含量越高。
这次检测结果如何？
在这次的RT-PCR技术中，研究人员使用的检测标签有五个，分别是IP2、IP4、包膜蛋白基因片段（Envelope protein gene, E）和核蛋白基因片段（Nucleoprotein，N1和N2）。
在巴塞罗那9个污水样本中，在2019-03-12的样本中检测到IP2和IP4两个核酸片段的存在。
这次是否检测到了新冠病毒？
实际上，很难说有检测到。在这篇论文下面有一段同行评议，我复制上来。
The authors do not detect SARS-CoV-2 in samples from 2019 March. Rather, they do detect IP2/IP4 resembling SARS-CoV-2. Whatever virus it is it does not have the E and N1/N2 of SARS-CoV-2. Fluctuations in qRT-PCRs even in 2020 samples -different sewers- are way too high to trust the reliability of the RT-PCRs. However, their approach is amazing. I hope they use a metagenomic approach to sequence to sewers rather than doing an RT-PCR assay, which doesn't look very rigorous.
（作者没有在2019年3月的样本中检测到新冠病毒。相反，他们检测到类似新冠病毒的IP2/IP4。无论这是什么病毒，它都没有新冠病毒的E和N1/N2。即使在2020年的样本（不同的下水道）中， qRT-PCR的波动也太大，无法信任RT-PCR的可靠性。然而，他们的方法是惊人的。我希望他们用一种宏基因组方法来对下水道进行测序，而不是做一种看起来不太严格的RT-PCR分析）
新冠病毒和其他冠状病毒（例如SARS病毒）在核酸序列上是有类似的地方，只检测到两个碎片是无法判断样本中含有新冠病毒，正如我们不能因为看到一个人是黄皮肤黑头发就认定他是中国人，因为他也可能是日本人。
再退一步说，即便只是IP2和IP4，无论按照中国还是美国疾控中心的标准，这个检测结果其实都算是阴性的，中美疾控中心关于RT-PCR对新冠病毒的核酸检测，阳性定义是在扩增40个循环内达到阳性（如果是学术研究的话，需要35或者30个循环内达标才算阳性）。
因此在专业人士对于本项研究的看法中，质疑声音更多。其他的质疑还有缺乏阴性对照等，但主要是上面这些问题。
这和之前哈佛用百度数据研究武汉疫情爆发时间的论文如出一辙。认定新冠病毒在2019年3月就出现（在无论哪个国家），这将是一个非常巨大的发现。如果这是正确的，将会深远地改变我们对于病毒起源的认识，我们目前对于病毒流行病学、防治策略也可能做出很多改变。
然而从这个研究的方法来看，它是存在诸多问题的。
如果这项研究得到承认，将打破有关该病毒起源于中国的公认时间表。
后续如证实从去年3月巴塞罗那污水中发现的就是COVID-19病毒片段，那会是目前发现已知最早的新型冠状病毒。
怎么证实?当然是第三方机构重复实验了，问题是研究团队已经无法重复2019年3月的阳性样品了，因为第一次检测就把样本耗完了，这就很被动了。虽然团队认为以他们严谨的实验设计，样本被污染是不可能的，但无法找到重复的方案很可能结果就无法证实。
证实这一发现的另一种方法是，从2019年3月在巴塞罗那医院的患者那里搜集保存的血液样本检测。如果病毒在西班牙传播，甚至短暂传播，那么有些人很可能会因流感样症状而住院样本被保存下来，但这样的研究在绝大多数国家都是不被允许的，这涉及到未获得患者知情同意和伦理问题。
巴塞罗那大学表示这研究已在medRxiv上预印且已“投稿至影响力很高的期刊”。
在这项研究中，研究人员正在检查巴塞罗那两个大型污水处理厂的样本，以检测该城市中病毒的演变。
在巴塞罗那大学研究公布之前，意大利国立卫生研究院在意北部城市去年12月收集的废水样本中检测到新冠病毒，比该国首例新冠肺炎本土病例确诊时间提前两个多月。现在全世界正在研究废水中的COVID-19。
巴塞罗那的研究人员从4月13日至5月25日的每周样本开始分析，并研究了今年早些时候的冷冻档案样本。
分析最早于1月15日-在巴塞罗那确认首例官方病例之前41天，在巴塞罗那污水中检测到了新冠状病毒。
这触发了研究人员进一步研究，他们测试了2018年1月至2019年12月的冷冻样品。所有样品均针对SARS-CoV-2基因组存在阴性，但2019年3月12日除外，在SARS-CoV-2基因水平较低但呈阳性的情况下。
由于大多数COVID-19病例表现出与流感相似的症状，因此这些病例可能被伪装成流感。
中国的遭遇就是吹哨人的待遇。不管最终结果如何，新冠病毒已经撕裂了人类社会。让我们看到所谓的和平和信任，对地球人是多么的脆弱和靠不住。战后七十年没有发生全球性的战争，实属幸运而已。我看就是核武器现在都不能保证三战不会来临。中印因为高原无人荒漠大打出手，让人感到我们人类确实是非常好战和非常喜欢猜忌的一种生物。
1.考虑到新冠疫情 对世界的巨大影响，西班牙这个研究的发布，就不只是学术层面，背后更有着政治影响，所以，样本污染（甚至造假）的可能性微乎其微，尽管这个研究还没有经过同行评审，但是可靠性应该很强；
2.废水监测已经是疫情监控和追踪的重要手段，从监控层面来看，这里有一个大前提——患者感染新冠病毒后3天内，其粪便中即可检出病毒——3天的发现时间，比普遍出现症状的7天时间窗口更短，对疫情防控而言，可以部分地消除“感染—症状—检测确诊治疗”的滞后性，同时为公共卫生部门的决策提供帮助，比如提早采取隔离、封锁措施。
在荷兰阿默斯福特，该国KWR水资源研究所的科学家在当地报告首例病患前，就从废水中检测出了新冠病毒的RNA。荷兰通过临床手段确认该国首例新冠肺炎患者后4天，该国公共卫生与环境研究所的科学家就在阿姆斯特丹史基浦机场的废水中找到了病毒踪迹。除了荷兰，美国、瑞典等国也在废水中发现了新冠病毒的踪迹。[1]
从追溯层面来看，就是本题。这次发现，是将同样西班牙检测出新冠病毒踪迹的废水样本的“1月15日”、意大利样本的“2019年12月”彻底前推，很“遥远”地推到了去年3月份！这个结果足够令人目瞪口呆。
3.当初意大利公布消息时，说的是“有可能新冠病毒在去年12月份已在意大利北部传播，而当时并没人意识到”，西班牙研究的表述有同样的内涵，“这一研究结果表明世界其他地区很可能也发生了类似情况，但许多病例或因被误诊为流感病例而被掩盖”。新冠是一种新型疾病，从未有过，在初期被误诊且被当作普通疾病忽视的可能性相当高。所以，在先出现的地区和国家，很可能就是“只要我不检测就没有感染”的先行版本——“未重视未研究我就没有”，在这种应对路径之下，对于公共卫生管理的疏漏和流行疾病防控上的短板，反倒成了他们避免成为“新冠首发地”和“政治受气包”的庇护伞，简直讽刺而可笑。
4.科学求证当然要审慎，但是舆论战绝对不能只求一板一眼，何况是，远方千里送人头。既然有瓜，就往死里吃，吃出味道，吃出态度，吃出气势，0202年了，我们不能总是输在声音上。
参考
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