RNA的提取中为什么要先加异丙醇再加乙醇？ 第1页

抽RNA如果希望得率高，可以先加入NaCl或醋酸铵，再加异丙醇，-20度醇沉过夜。第二天离心去上清，用乙醇洗两遍。

下面说原理：

1. 把溶液调成高盐：

盐离子和RNA抢水，破坏RNA的水化层，导致RNA和水的亲和力降低，方便醇沉。

如果你的RNA少，醇沉不出来，推荐加盐。

有次体外转录RNA，手边RNase free的高盐溶液用完了，省了这步，就没醇沉出RNA。第二天重做，加了盐，RNA就出来了。

2. 先用异丙醇醇沉：

异丙醇和RNA抢水，破坏RNA的水化层，导致RNA析出沉降。

异丙醇羟基多，抢水能力大于乙醇，醇沉效果更好。

但是，异丙醇挥发性远远低于乙醇，很难晾干。

3.后用乙醇洗两遍：

乙醇可以带走高盐留下来的盐离子，带走挥发不干净的异丙醇，带走醇沉时同样析出的蛋白质和脂类。

乙醇挥发快，很快就能干，是异丙醇比不了的优点。

具体步骤，可参考NEB E2050说明书的RNA纯化。

评论区有人说搜不到，可以百度NEB，进入NEB主页，搜索E2050，进入产品页，下载PDF。

具体步骤和原理，也可参考分子克隆指南。尽管这书特别有用，不过我猜很多人都没兴趣翻这本大部头。